БИОХИМИЯ, 1984, том 49, вып. 2, с. 275–284
УДК 577.152.344
Очистка и свойства нейтральной металлопротеазы из термофильной бактерии Bacillus brevis
Институт химической и биологической физики АН ЭССР, Таллин
Институт химии АН ЭССР, Таллин
Поступила в редакцию 20.05.1983
Аннотация
Из культуральной жидкости термофильной бактерии Bacillus brevis 7882 методом аффинной хроматографии на грамидидин-C-агарозе выделена нейтральная металлопротеаза с выходом 53% и очисткой в 195 раз. Фермент гомогенен при диск-электрофорезе в полиакриламидном геле при pH 4,5; при изоэлектрофокусировании обнаруживаются 2 компонента с изоэлектрическими точками 6,0 и 5,5. Молекулярная масса протеазы составляет 35000. Обратимыми ингибиторами фермента являются комплексоны металлов — ЭДТА, о-фенантролин и тетраэтиленпентамин, в то время как ингибиторы сериновых протеаз не влияют на его активность. Фермент содержит ~1 г-атом цинка на 1 моль белка. pH-Оптимум гидролиза ФАГЛА* нейтральной протеазой равен 6,7 с pK1 = 5,6 и pK2 = 7,7. Температурный оптимум протеолитической активности равен 60°, в присутствии CaCl2 — 75°. Термостабильность протеазы также повышается в присутствии ионов кальция. При действии на B-цепь окисленного инсулина нейтральная протеаза гидролизует все связи, образованные аминогруппами лейцина и фенилаланина, а также связи Phe1-Val2, Leu17-Val18 и Phe25-Tyr26. По аминокислотному составу, физико-химическим свойствам и субстратной специфичности нейтральная протеаза Bac. brevis сходна, но не идентична с термолизином или другими микробными нейтральными металлопротеазами.
Текст статьи
Сноски
* Принятые сокращения : ФАГЛА — 3-(2-фурил)акрилоил-глицил-L-лейцинамид; PIPES — пиперазин-N,N'-бис(2-этансульфокислота); HEPES — 2-оксиэтилпиперазин-N'-З-пропансульфокислота.