БИОХИМИЯ, 1984, том 49, вып. 1, с. 3–11
УДК 577.17:547.963.3
Очистка и сравнительное изучение свойств глюкокортикоид- и эстроген-рецепторных комплексов печени крыс
Лаборатория молекулярной биологии и биоорганнческой химии им. А.Н. Белозерского МГУ им. М. В. Ломоносова, Москва
Поступила в редакцию 17.05.1983
Аннотация
Проведена параллельная очистка глюкокортикоид- и эстроген-рецепторных комплексов из цитозоля печени крыс и определены некоторые свойства очищенных стероид-рецепторных комплексов (СРК). Удобным и универсальным способом очистки СРК разных типов оказалась разработанная ранее процедура, где двухэтаппая обработка цитозоля ДНК-целлюлозой чередуется с выслаиванисм СРК сульфатом аммония. Представлены модификации схемы, позволяющие несколько повысить степень очистки рецепторов. Количество эстроген-рецепторных комплексов (ЭРК), выделенных из цитозоля печени самцов и самок крыс, в 20—40 раз меньше количества глюкокортикоид-рецепторных комплексов (ГРК), полученных параллельно из равного объема того же цитозоля. Очищенные СРК обоих типов интенсивно связываются с гомологичной ДНК, но не с поли(A). Элюция СРК с ДНК-целлюлозы практически завершается при концентрации NaCl 0,4 M. При этом ЭРК и ГРК проявляют тонкие, но достоверные различия в солерезистентности их ассоцнатов с ДНК: связь ЭРК с ДНК устойчива при воздействии NaCl вплоть до 0.1 M, тогда как заметная доля ГРК элюируется 0,1 М, NaCl с ДНК-целлюлозы. Стабильность очищенных ЭРК выше стабильности очищенных параллельно ГРК, что, очевидно, отражает различия в константах связывания гормонов рецепторами. Приведены данные о стабильности рецепторов при разных условиях среды и даны некоторые рекомендации по повышению стабильности СРК и ее учету в ходе экспериментов.