БИОХИМИЯ, 1983, том 48, вып. 12, с. 2056–2066
УДК 577.152.1
Очистка и физико-химические свойства глутаматдегидрогеназ одноклеточной зеленой водоросли Ankistrodesmus braunii
Аннотация
Из клеток Ankistrodesmus braunii выделены гомогенная NAD(P)-глутаматдегидрогеназа и высокоочищенная NADP-глутаматдегидрогеназа (очистка в 150 раз) и проведено сравнительное изучение их физико-химических свойств. Показано, что NAD(P)-глутаматдегидрогеназа является гексамером (молекулярная масса субъединиц 51900 Да), содержащим 25% α-спирали. Фермент устойчив при прогревании в течение 5 мин вплоть до 70°, а также в концентрированных растворах мочевины (до 6 М). Присутствие субстратов в инкубационной смеси ведет к быстрой инактивации NAD(P)-глутаматдегидрогеназы даже в 2 М мочевине. n-Оксимеркурибензоат ингибирует этот фермент только при высоких концентрациях (больше 1 мМ), причем дезаминирование в гораздо большей степени, чем аминирование. На этом основании высказано предположение о возможном различии конформационных состояний NAD(P)-глутаматдегидрогеназы A. braunii при катализе реакции в прямом и обратном направлениях. NADP-зависимый фермент (молекулярная масса 380000 Да) более лабилен, чем NAD(P)-глутаматдегидрогеназа. Он быстро инактивируется в 3 М мочевине и при прогревании при 55°. NADP-глутаматдегидрогеназа сильно ингибируется уже низкими концентрациями n-оксимеркурибензоата (Ki=(6—9)·10-7 М); из всех субстратов наибольшим защитным действием обладает NADPH. Это указывает на наличие SH-группы в активном центре фермента. Полученные данные свидетельствуют, что две конститутивные глутаматдегидрогеназы A. braunii являются разными ферментами.