БИОХИМИЯ, 1983, том 48, вып. 10, с. 1739–1746

УДК 577.123

Очистка и идентификация информационной РНК иммунного (гамма) интерферона из спленоцитов человека

© 1983 Л.А. Лях, С.Н. Хилько, Р.Д. Аспетов, Д.Н. Носик, А.С. Новохатский, Т.И. Тихоненко

Аннотация

Описано выделение, физико-химическая и биологическая характеристика препаратов суммарной РНК из первичной культуры спленоцитов человека. Этот источник, позволяющий получать препараты с повышенным содержанием мРНК иммунного интерферона человека, отличается низким суммарным содержанием РНК и необычно высокой активностью РНКаз. Поэтому специально отработаны условия выделения мРНК в отсутствие примесей ДНК при эффективном подавлении активности РНКаз (гомогенизация клеток и отделение цитоплазмы при температуре -10°, присутствие ингибиторов РНКаз — рибонуклеозид-ванадиловые комплексы или комбинация ауринтрикарбоновой кислоты с дитиотреитолом). Полученные препараты суммарной РНК очищали хроматографией на олиго(dT)-целлюлозе и транслировали в бесклеточной системе из ретикулоцитов кролика. Эти препараты свободны от неспецифических ингибиторов трансляции, обычно присутствующих в мРНК из лимфоидных клеток. В бесклеточной системе мРНК из индуцированных стафилококковым энтеротоксином A спленоцитов человека кодируют синтез биологически активного интерферона, идентифицированного как иммунный (гамма) интерферон человека на основании серологического анализа. Полученные препараты мРНК иммунного интерферона предполагается использовать в дальнейшем для клонирования соответствующего гена в бактериях.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha