БИОХИМИЯ, 1983, том 48, вып. 10, с. 1643–1653

УДК 577.153.35.3

Двухстадийный механизм ингибирования неорганической пирофосфатазы фторид-ионом

© 1983 И.Н. Смирнова, А.А. Байков

Аннотация

Кинетическими и спектральными методами изучены взаимодействия в системе фермент — Mg2+— F — пирофосфат (или имидодифосфат — негидролизуемый аналог пирофосфата), лежащие в основе механизма ингибирования неорганической пирофосфатазы из дрожжей фторид-ионом. Для непрерывной регистрации ферментативной реакции использован автоматический анализатор фосфата, работающий в секундной шкале времени. Зависимость константы скорости инактивации от концентрации NaF имеет вид кривой с насыщением. Соответствующие предельные значения для PPi (pH 6,2—7,2) и имидодифосфата (pH 7,2) составляют 5,3 и 3,9 мин-1. Начальная скорость гидролиза PPi при насыщающей концентрации фторида уменьшается на 90%. NaF и имидодифосфат изменяют спектр белка в области 270—310 нм и взаимно упрочняют связь друг друга с белком. Для присоединения F к белку необходимо заполнение магнием центра с Kd=0,15 мМ. Свободный фермент и его комплекс с Ca2+ не связывают фторид-ион. Результаты показывают, что ингибирование пирофосфатазы фторидом протекает в две стадии. Сначала ингибитор быстро и обратимо присоединяется к иону Mg2+ на ферменте, вызывая уменьшение каталитической активности в 10 раз, после чего происходит медленная изомеризация фермент-субстратного комплекса, приводящая к полной потере активности.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha