БИОХИМИЯ, 1983, том 48, вып. 6, с. 897–905
УДК 577.15.025
Взаимодействие микросомального цитохрома P-450 со спин-мечеными аналогами субстратов
Аннотация
Для изучения структуры активного центра микросомального цитохрома P-450 предложено использовать йодсодержащие стабильные нитроксильные радикалы с различным расстоянием от N—O-группы до атома йода. Эти радикалы вызывают изменения оптических спектров иона Fe3+ активного центра фермента аналогично субстратам 1-го типа и приводят к существенному торможению микросомального окисления субстратов цитохрома P-450 1-го и 2-го типов; торможение не связано с ингибированием NADPH-цитохром-c-редуктазы и конверсией цитохрома P-450 в P-420. Субстраты цитохрома P-450 (аминопирин) защищают фермент от инактивации радикалами. Йодсодержащие радикалы ковалентно связываются с цитохромом P-450 в районе активного центра. Из полученных кривых торможения окисления субстратов в присутствии радикалов рассчитаны величины константы диссоциации обратимого комплекса фермент — радикал и константы скорости мономолекулярного превращения в комплексе. Методом ЭПР обнаружено взаимодействие между ионом Fe3+ и радикалом, находящимся в активном центре цитохрома P-450. Из кривых насыщения спектров ЭПР радикалов при 77 К определен вклад иона Fe3+ во время релаксации (T1) радикалов, ковалентно связанных с цитохромом P-450, и оценены расстояния от N—О-группы этих радикалов до иона Fe3+ в активном центре фермента.