БИОХИМИЯ, 1983, том 48, вып. 5, с. 837–843
УДК 577.152.3
Очистка и свойства GTP-циклогидролазы дрожжей Pichia guilliermondii
Аннотация
GTP-циклогидролаза выделена из железонедостаточных клеток Pichia guilliermondii и очищена в 440 раз путем обработки экстрактов стрептомицин сульфатом, фракционирования белков (NH4)2SO4 при 25—45% насыщения, гель-фильтрации через сефадекс G-200 и хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. Кривые зависимости удельной активности GTP-циклогидролазы от концентрации субстрата и кофактора имеют негиперболический вид; [S]0,5 для GTP и Mg2+ соответствовали 2,2·10-5 и 2·10-4 М. Активность фермента угнетается пирофосфатом ([I]0,5=5,8·10-4 М), ортофосфатом ([I]0,5=4,5·10-3 М), ионами тяжелых металлов и хелатирующими соединениями. Температурный оптимум действия фермента 42—45°. Фермент лабилен при 4°, но хорошо сохраняется при -15°. Из реакционной среды очищен и идентифицирован пиримидиновый продукт циклогидролазной реакции — 2,5-диамино-6-окси-4-рибозиламинопиримидин-5′-фосфат, а также пирофосфат.