БИОХИМИЯ, 1983, том 48, вып. 4, с. 531–538
УДК 577.158
Модификация аргининовых остатков глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы из пекарских дрожжей
Аннотация
Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа из пекарских дрожжей подвергается инактивации в присутствии бутандиона с одновременной модификацией 2 аргининовых остатков на субъединицу фермента. Инактивация является реакцией первого порядка по отношению к бутандиону, следовательно, лишь один из модифицируемых остатков важен для функции. Модификация аргининовых остатков не приводит к заметным изменениям спектров флуоресценции и кругового дихроизма фермента и не отражается на характере его седиментации в ультрацентрифуге. Модифицированный фермент сохраняет способность связывать NAD, однако с меньшим сродством, чем нативный. Переход фермента из апо- в холоконформацию отражается на доступности для модифицирующего агента важных для активности аргининовых остатков. Полученные результаты удовлетворительно объясняются на основании механизма, согласно которому реакция модификации холофермента проходит через стадию образования его обратимого комплекса с бутандионом, в то время как в случае апофермента эта стадия отсутствует. Переход в хлороформу увеличивает константу скорости инактивации фермента под влиянием бутандиона. 3-Фосфоглицериновый альдегид не влияет на инактивацию апофермента, вызванную бутандионом. Добавление субстрата к комплексу апофермент-NAD приводит к защите от инактивации, которая является полной при насыщающей концентрации лиганда. Аналогичное влияние оказывает α-глицерофосфат, являющийся конкурентным ингибитором по отношению к субстрату.