БИОХИМИЯ, 1983, том 48, вып. 3, с. 454–463
УДК 577.1 + 547.963
Реконструкция холестерингидроксилирующей системы на основе иммобилизованного адренодоксина
Аннотация
Изучена реконструкция функционально активной холестерингидроксилирующей системы на основе ковалентно иммобилизованного адренодоксина и сорбированных препаратов адренодоксинредуктазы и холестерингидроксилирующего цитохрома P-450 — цитохрома P-450 (ХГ). Межбелковые взаимодействия осуществляются с высоким сродством независимо от наличия в активном центре холестерина или добавления продукта реакции — прегненолона. Взаимодействия цитохрома P-450 (ХГ), связанного с субстратом, и цитохрома P-450 (ХГ), полученного в результате ферментативной реакции превращения холестерина в прегненолон с иммобилизованным адренодоксином, не сопровождались изменением спектральных свойств препаратов гемопротеида, в то время как для низкоспиновых форм, индуцированных твином 20 и прегненолоном, наблюдались спектральные изменения, характеризующие переход к высокоспиновой форме. Твин 20 дестабилизирует комплекс иммобилизованного адренодоксина и цитохрома P-450 (ХГ), что вызывает частичное вытеснение адреноксинредуктазой цитохрома P-450 (ХГ), сорбированного на адренодоксин-сефарозе. Установлено, что концентрация функционально активного тройного белкового комплекса достигает 40% от общей концентрации сорбированного цитохрома P-450 (ХГ); восстановление системы не сопровождается диссоциацией тройного комплекса на отдельные компоненты. Проведено сравнение каталитических свойств иммобилизованной и растворимой холестерингидроксилирующих систем, позволившее установить значительное сходство в функционировании при различных способах реконструкции системы.