БИОХИМИЯ, 1983, том 48, вып. 2, с. 339–349
УДК 577.152
Структурно-функциональная неидентичность субъединиц креатинкиназы из скелетных мышц кролика
Аннотация
Креатинкиназа из скелетных мышц кролика очищена до гомогенного состояния хроматографией на сефарозе с иммобилизованным голубым декстрином. Показано, что фермент после инкубации в 5—7 М мочевине подвергается разделению на две практически равные фракции при хроматографии на сефарозе с иммобилизованным аналогом ATP. Эти фракции соответствуют двум препаратам креатинкиназы, состоящим из разных субъединиц (М и М′), слегка различающимся по подвижности при электрофорезе в присутствии 0,1%-ного DS-Na. Препарат фермента с меньшей подвижностью катализует процесс фосфорилирования креатина (прямая реакция) и процесс переноса фосфорильного остатка с фосфокреатина на ADP (обратная реакция), однако при разных оптимумах pH (8,5—9,5 и 7,5—8,0, соответственно). Более подвижный при электрофорезе препарат фермента также катализирует прямую и обратную реакции, однако в другом диапазоне pH — 5,5—5,7 и ниже 5,0, соответственно. Сделано предположение, что процессы ассоциации-диссоциации имеют большое значение для регуляции активности фермента: удельная активность препаратов креатинкиназы, содержащих М- и М′-, а также только М-субъединицы, увеличивается с уменьшением их концентрации в реакционной смеси. Обсуждается возможность использования метода аффинной модификации для исследования неэквивалентности субъединиц. Показано, что γ-(n-азидоанилид) ATP с большей скоростью модифицирует М-субъединицу, чем М′- субъедииицу фермента. ADP по-разному защищает субъединицы от модификации.