БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 11, с. 1792–1801
УДК 577.1+547.963
Анализ белок-белковых взаимодействий в полной по ферментному составу холестерингидроксилирующей системе
Аннотация
На основе ферментативного превращения высокоспиновой формы цитохрома P-450(ХГ) в низкоспиновую и тандемной спектрофотометрии различных стехиометрических смесей белков в присутствии прегненолона и твина 20 изучено взаимодействие компонентов холестерингидроксилирующей системы — адренодоксинредуктазы, адренодоксина и цитохрома P-450(ХГ). При реконструкции полной по ферментному составу системы в присутствии NADPH образование тройного белкового комплекса сопровождается 2—10-кратным увеличением Kдис по сравнению с двойными комплексами адренодоксинредуктаза-адренодоксин и цитохром P-450·адренодоксин. Неионный детергент твин 20 дестабилизирует комплекс адренодоксина с цитохромом P-450(ХГ), вследствие чего адренодоксинредуктаза может вытеснять адренодоксин из двойного комплекса. В то же время это вытеснение не наблюдалось в присутствии прегненолона, который не изменяет сродства адренодоксина к цитохрому P-450(ХГ), что свидетельствует об образовании в этих условиях тройного белкового комплекса. Титрование адренодоксином различных стехиометрических смесей адренодоксинредуктазы и цитохрома P-450(ХГ) в присутствии твина 20 показало, что преимущественное образование двойного комплекса адренодоксина с адренодоксинредуктазой коррелирует с увеличением Kдис комплекса цитохрома P-450(ХГ) с адренодоксином, и при относительно низкой концентрации детергента адренодоксин взаимодействует как с адренодоксинредуктазой, так и с цитохромом P-450(ХГ) с образованием тройного белкового комплекса.