БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 10, с. 1649–1662
УДК 577.150.2
Роль ионов кальция в проявлении каталитической активности фосфолипазы D
Аннотация
Изучены особенности реакции расщепления мицеллярного лецитина фосфолипазой D и выявлена роль металла в проявлении каталитической активности фермента. Показано, что Ca2+ участвует в образовании каталитически активного промежуточного фермент-субстратного комплекса со строгим стехиометрическим соотношением субстрата, фосфолипазы, активатора (DS-Na) и ионов кальция. Исследована кинетика торможения процесса ионами лантана, ионами фтора и ЭДТА. Показано, что торможение реакции в системе лецитин — DS-Na — ионы Ca2+ — фосфолипаза D ионами лантана обусловлено заменой двухвалентного Ca2+ трехвалентиым La3+ в составе промежуточного комплекса. Ингибирующее действие ионов фтора связано с внедрением электроотрицательного иона в координационную сферу промежуточного комплекса и нарушением гидрофобного связывания между лигандами. Ингибирующее действие ЭДТА проявляется на стадии связывания белок — субстрат и не связано с хелатирующей способностью ЭДТА в отношении Ca2+. Показано, что роль ионов кальция не ограничивается его связыванием с фосфолипазой D. Ионы кальция необходимы также для нейтрализации избыточного заряда на поверхности субстратных мицелл, создания необходимой ионной силы раствора и модификации поверхности субстратной фазы на границе раздела фаз. Каталитическая функция кальция выражается в формировании участка «узнавания» активного центра фосфолипазы D.