Изучение связывания катионов с субфрагментом I миозина при помощи флуоресцентного зонда Eu³⁺

Аннотация

Показано, что связывание Eu³⁺ с субфрагментом I миозина (SI) сопровождается появлением флуоресценции с максимумом при 595 нм, возрастающей при увеличении концентрации EuCl₃. Параллельно с флуоресценцией возрастает ATPазная активность SI. Добавление двухвалентных катионов Ca²⁺ и Mg²⁺ вызывает тушение флуоресценции связанного Eu³⁺ на 8—12%; этому соответствует ингибирование Eu³⁺-ATPазы ионами Mg²⁺. При малых концентрациях Eu³⁺ (до 0,1 мМ) тушения флуоресценции катионами Mg²⁺ и Са²⁺ не наблюдается; в этих условиях Mg²⁺ активирует ATPазу SI в присутствии Eu³⁺. Eu³⁺ активирует ATPазу SI в присутствии малых концентраций Ca²⁺ (до 0,1 мМ), но ингибирует при больших концентрациях. NaCl не влияет на интенсивность флуоресценции связанного Eu³⁺, хотя значительно подавляет ATPазную активность SI в присутствии EuCl₃. Предполагается существование поблизости от активного центра SI участка связывания двухвалентных катионов; ион Eu³⁺ (ионный радиус которого близок к ионному радиусу Ca²⁺), взаимодействуя с поверхностью белка, занимает и этот участок, чем обусловлена активация ATPазы SI. Из таких участков Eu³⁺ может быть вытеснен катионами Ca²⁺ или Mg²⁺, но не ионами Na⁺. Отсюда следует, что двухвалентные и одновалентные катионы связываются в разных участках. Полученные данные могут служить как еще одно подтверждение возможности того, что регуляция ATPазной активности миозина двухвалентными и одновалентными катионами может осуществляться путем непосредственного связывания катионов с белком.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: