БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 8, с. 1358–1365
УДК 577.158
Сульфгидрильные группы α-кетоглутаратдегидрогеназы из грудной мышцы голубя
Аннотация
Проведено изучение числа и реакционной способности SH-групп α-кетоглутаратдегидрогеназного компонента α-кетоглутаратдегидрогеназного комплекса с использованием различных тиоловых реагентов ·— ДТНБ, n-ХМБ и НБД-хлорида. Общее число SH-групп, определенное в присутствии детергента, равно 12 в расчете на мономер КГД. В нативном ферменте ДТНБ титрует 3—4 SH-группы, которые по своей реакционной способности делятся на три типа. n-ХМБ и НБД-хлорид модифицируют 5—6 SH-групп КГД. В присутствии α-кетоглутарата и его активного аналога, α-кетоадипата, две SH-группы фермента — наиболее и наименее реакционноспособные — становятся недоступными действию ДТНБ, но титруются 30—100-кратным молярным избытком n-ХМБ. Присоединение α-кетокислот, являющихся конкурентными ингибиторами КГД, не приводит к маскированию SH-групп фермента. При блокировании 3—4 SH-групп КГД активность фермента снижается на 30% за счет модификации тех же двух SH- групп, которые в присутствии субстрата недоступны действию ДТНБ. Судя по спектрам флуоресценции S-НБД-производных КГД, эти две SH-группы находятся в гидрофобном окружении. По числу и реакционной способности тиоловых групп апофермент не отличается от холофермента, однако добавление к апоферменту α-кетоглутарата не приводит к уменьшению числа реагирующих с ДТНБ SH-групп и скорости их модификации. Сделан вывод о том, что маскирование двух SH-групп холофермента является результатом конформационных перестроек, сопутствующих образованию продуктивного тройного комплекса фермент — кофермент — субстрат. Обсуждается возможность локализации этих групп вблизи от активного центра.