БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 6, с. 999–1006
УДК 576.316.3.088
Белковый состав фракций хроматина, различающихся по связи с ядерными структурами в условиях низкой ионной силы
Аннотация
Печень крысы разрушали в буфере, содержащем 30 мМ трис-HCl pH 7,6, 5 мМ MgCl2, 0,25 М сахарозу, 70 мкМ 2-меркаптоэтанол (ТМС). Ядра очищали через 2,2 М сахарозу в том же буфере, затем трижды отмывали в ТМС. К ядерному осадку добавляли 10 мМ трис-HCl pH 7,6, 0,2 мМ MgCl2 (ТМ) до концентрации ядер 1 мг/мл по ДНК, суспендировали и центрифугировали 10 мин при 800 g. В надосадочной фракции — около 60% ядерного ДНП в виде мононуклеосом и их олигомеров. Хроматин, не экстрагируемый из ядер в ТМ, отделяли от ядерных структур после обработки микрококковой нуклеазой. Отношение бслок/ДНК этой фракции хроматина примерно 2,5; среди белков этой фракции практически весь набор ядерных негистоновых белков. В хроматине, выходящем из ядер в ТМ, отношение белок/ДНК около 1,1, а количество негистоновых белков очень незначительно: кроме гистонов на электрофореграмме наиболее интенсивны две полосы, одна из которых соответствует белку A24, другая — кислоторастворимому белку с молекулярным весом 42500. Если к хроматину, выходящему из ядер в ТМ, добавить MgCl2 до 1,5—2,0 мМ и центрифугировать, как указано выше, то в надосадочной фракции остаются только мононуклеосомы, лишенные гистона H1.