БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 6, с. 977–986
УДК 577.154
Использование иммобилизации для изучения глицеральдегид-з-фосфатдегидрогеназы. Иммобилизованные мономеры
Аннотация
Описано получение активных иммобилизованных мономеров глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы путем диссоциации тетрамерной молекулы фермента, ковалентно связанной через одну субъединицу с сефарозой. Условия диссоциации были подобраны таким образом, чтобы активность непосредственно связанного с матрицей мономера сохранялась, а остальные субъединицы инактивировались и переходили в раствор. Принципиальным отличием предлагаемого метода получения субъединиц олигомерных ферментов является сохранение активности иммобилизованного ковалентно мономера во время обработки мочевиной, так как общепринятым подходом является денатурация всех субъединиц и последующая реактивация субъединицы, связанной с матрицей. Полученные иммобилизованные мономеры дегидрогеназы обладают практически теми же величинами V и Km для субстрата и NAD, что и иммобилизованные тетрамеры. При реассоциации иммобилизованных мономеров с денатурированной в мочевине дегидрогеназой образуются связанные с носителем тетрамеры, а при реассоциации с нативной дегидрогеназой — иммобилизованные тримеры. Предложен методический подход для изучения роли межсубъединичных взаимодействий в проявлении кооперативных эффектов, основанный на использовании препаратов, содержащих иммобилизованную дегидрогеназу различной степени олигомерности.