БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 6, с. 950–956
УДК 577.1.612.744
Характеристика субстратов эндогенного фосфорилирования фрагментов саркоплазматического ретикулума быстрых скелетных мышц кролика
Аннотация
Разделение фосфорилированных фрагментов саркоплазматического ретикулума диск-электрофорезом в полиакриламидном геле в присутствии DS-Na показало, что радиоактивность распределена в зонах белков с мол. в. 95000 и 6000—8000. Фосфорилирование белка с мол. в. 95000 является Ca2+-зависнмым. Установлено, что триптическая обработка фосфорилированных фрагментов саркоплазматического ретикулума быстрых скелетных мышц ведет к потере радиоактивности на 60—70%, обработка фосфолипазой C из Clostridium welchii снижает количество включенного фосфата на 40—50%. Воздействие ингибитора cAMP-зависимой протеинкиназы приводило к снижению фосфорилирования обоих субстратов. Субстрат фосфорилирования с мол. в. 6000—8000 не прокрашивается амидошварцем 10B и кумаси ярко-голубым. Экстракцией подкисленным хлороформ-метанолом выделен протеолипид, удельная радиоактивность которого в 3—4 раза выше по сравнению с исходным препаратом фосфорилированных мембран СР. Методом тонкослойной хроматографии на пластинках Silufol и силикагеле KCK показано, что протеолипид после 2-кратного переосаждения диэтиловым эфиром хроматографически негомогенен и локализуется в зоне с Rf от 0,6 до 0,8. Спектр флуоресценции протеолипида в растворе хлороформ — метанол — HCl представляет собой асимметричную бесструктурную полосу с максимумом при длине волны 350 нм. Обсуждается возможная роль фосфорилазы b и протеолипида в проявлении функциональной активности фрагментов CP.