БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 5, с. 760–766
УДК 577.158.54
Субъединичные взаимодействия в люциферазе светляков Luciola mingrelicа. Их роль в проявлении активности фермента и процессе термоинактивации
Аннотация
Показано, что каталитической активностью обладают димеры люциферазы светляков, а мономеры неактивны. Определена константа диссоциации (Kд) активных димеров при pH 7,0—8,4 в интервале температур 15—35° и при концентрации MgSO4 от 37 до 370 мМ и Na2SO4 от 49 до 490 мМ. Показано, что при варьировании указанных условий Kд мало изменяется и составляет 13 нм. Изменение природы соли (замена MgSO4 на Na2SO4) уменьшает Kд в 2,5 раза. Эффективная константа скорости инактивации люциферазы (kин) увеличивается более чем в 5 раз при уменьшении концентрации люциферазы от 200 до 3,5 нм в присутствии 37 мМ MgSO4. При увеличении MgSO4 до 185 мМ kин перестает зависеть от концентрации люциферазы. Уменьшение kин наблюдается и при увеличении концентрации Na2SO4. Предложена схема инактивации люциферазы в растворе, учитывающая инактивацию мономера и димера люциферазы. Выведены уравнения, по которым рассчитаны константы инактивации мономера (k1) и димера (k2) люциферазы при различных pH, температуре и концентрации соли. Отмечен эффект стабилизации люциферазы солями более чем в 10 раз. Добавки соли сильнее стабилизируют мономер, чем димер фермента. Зависимость эффективной kин люциферазы от pH и температуры определяется в первую очередь зависимостью константы скорости инактивации димера от pH и температуры.