БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 4, с. 686–694
УДК 577.159
Использование методов аффинной хроматографии для очистки специфических эндонуклеаз Eco RI и Bgl II
Аннотация
Методами аффинной хроматографии получены высокоактивные препараты специфических эндонуклеаз Eco RI из клеток Е. coli и Bgl II из клеток Bacillus globiggii. Для выделения и очистки ферментов применяли разрушение клеток ультразвуком, высокоскоростное центрифугирование и хроматографию. В качестве аффинных сорбентов использовали голубой декстран-сефарозу, фолат-сефарозу, фенил-сефарозу. Подобраны оптимальные условия сорбции и элюирования эндонуклеаз без промежуточных стадий диализа и концентрирования. Последовательное сочетание вышеприведенных сорбентов с различными лигандами позволяет достигнуть высокой эффективности очистки. Очищенные препараты ферментов не содержат неспецифических нуклеаз, фосфатаз, достаточно концентрированы и могут быть использованы для специфического гидролиза ДНК.