БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 3, с. 478–488
УДК 547.95
Исследование взаимодействия NADH-дегидрогеназы из мембран М. lysodeikticus с липидами в реконструированной системе
Аннотация
NADH-дегидрогеназа, изолированная из мембран бактерий M. lysodeikticus реконструирована в липосомы из липидов, полученных из этих же мембран. Наличие и степень реконструкции оценены методами двумерного иммуноэлектрофореза и фотореактивной гидрофобной метки. Тушение белковой флуоресценции гидрофильным тушителем I− практически не отличается для фермента в реконструированной системе и в растворе детергента, в то время как взаимодействующий с мембраной тушитель — хлорид цетилпиридиния был эффективен в первом случае и не эффективен — во втором. Получены доказательства наличия переноса энергии с белковых хромофоров NADH-дегидрогепазы в составе протеолипосом (λвозб = 286 нм) на гидрофобный флуоресцентный зонд пирен. В этом процессе принимает участие около 30% хромофоров в молекуле фермента. Акцептором электронов при окислении NADH в реконструированной системе может быть гидрофобный спиновый зонд, парамагнитный фрагмент которого располагается поверхностно yо не внутри гидрофобной фазы мембраны. Полученные результаты свидетельствуют об экспонированности значительной части молекулы фермента в окружающую среду и о взаимодействии меньшего объема молекулы с липидной фазой. Активный центр расположен на обращенной в воду части молекулы фермента. Предполагается, что молекула NADH-дегидрогеназы участвует в тепловой диффузии, позволяющей активному центру контактировать с поверхностными областями мембраны.