БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 3, с. 361–373
УДК 577.154
Влияние специфических антител на ассоциацию субъединиц глицеральдегид-з-фосфатдегидрогеназы
Аннотация
Антитела, выработанные у кроликов к глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназе (КФ 1.2.1.12) из пекарских дрожжей или из мышц крысы, строго специфичны к соответствующим антигенам и не обнаруживают перекрестной реакции. Взаимодействие с Fab-фрагментами специфических антител не отражается на активности глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы из дрожжей в соответствии с аналогичными данными, полученными ранее для фермента из мышц крысы. Антитела к дрожжевой дегидрогеназе, иммобилизованные на BrCN-активированной сефарозе, использованы для получения фермента, связанного с матрицей через комплекс антиген — антитело. Тетрамерная молекула глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, иммобилизованная таким образом, сохраняет полную активность и способность диссоциировать на димеры на холоду в присутствии ATP. При этом димер, остающийся связанным в комплексе с антителом, сохраняет активность в присутствии агентов, вызывающих инактивацию и переход в раствор второго димера. Тетрамер дрожжевой дегидрогеназы, ковалентно связанный с BrCN-активированной сефарозой через одну субъединицу, полностью устойчив в условиях, вызывающих диссоциацию, если он находится в комплексе с тремя молекулами специфических антител. Связывание четырех молекул Fab-фрагментов специфических антител на молекулу тетрамера защищает апо-глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу из мышц крысы от анионзависимой холодовой инактивации и термоинактивации в растворе. Связывание двух молекул антител, специфичных к глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназе из мышц крысы, с гибридным тетрамером, состоящим из димера дрожжевой дегидрогеназы, ковалентно связанного с сефарозой, и димера дегидрогеназы из мышц крысы, предотвращает диссоциацию тетрамера (переход димера «мышечного» типа в раствор). Гель-фильтрация через сефарозу 6B комплекса апо-глицеральдегид- 3-фосфатдегидрогеназы с Fab-фрагментами специфических антител показывает, что связывание Fab-фрагментов сдвигает равновесие тетрамер ⇄димеры, существующее в растворе апофермента, в сторону тетрамера. Сделано заключение, что специфические антитела усиливают межсубъединичные взаимодействия в олигомере путем стабилизации нативной третичной структуры отдельных субъединиц.