БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 2, с. 184–190
УДК 547.963.3
Аффинная модификация креатинкиназы из скелетных мышц кролика флуоресцентным аналогом ATP — γ-(n-азидоанилид)-1,N6-этеноаденозинтрифосфатом
Аннотация
Проведена модификация активных центров креатникиназы с помощью флуоресцентного аналога ATP — γ-(n-азидоанилид)-1,N6-этено-ATP*. Исследовано сродство аналога к ферменту, защита фермента от модификации субстратами. Стехиометрия связывания метки с ферментом равна 2:1. Выяснено, что одна из субъединиц модифицируется быстрее другой субъединицы, но различие в скоростях модификации небольшое. После ковалентного присоединения к ферменту флуоресценция метки увеличивается в 4—5 раз, что может свидетельствовать об изменении ее конформации или о специфическом взаимодействии с ферментом. Присоединенная метка увеличивает свечение при добавлении субстратов. По кривой титрования была получена константа диссоциации комплекса фермента с ADP, которая оказалась близкой к величине, полученной с использованием флуоресцентного зонда 2-толуидинонафтален-6-сульфоната. Обсуждаются возможности использования γ-(n-азидоанилид)-1,N6-этено-ATP для исследования функциональных и структурных характеристик фермента.