БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 1, с. 34–42
УДК 577.1 : 612.744
Эндогенное фосфорилирование фрагментов саркоплазматического ретикулума быстрых скелетных мышц кролика
Аннотация
В очищенных фрагментах мембран саркоплазматического ретикулума (СР) быстрых скелетных мышц кролика обнаружено включение 32P из [γ-32P]ATP в эндогенные мембранные компоненты и в гистон H1. Методом равновесного связывания [3H]сАМР с мембранами СР показано наличие мембраносвязанной протеинкиназы. Константа связывания [3H]сАМР с мембранами равна (2,5±0,003)·10-6 М-1, количество участков связывания 6,1±0,8 пмоль на 1 мг белка. Эндогенное фосфорилирование компонентов СР ингибировалось сАМР и cGMP в концентрациях от 10-7 до 10-6 М. Установлена зависимость величины фосфорилирования от Mg2+ и Ca2+. Термостабильный белковый ингибитор сАМР-зависимой протеинкиназы подавлял на 30—40% эндогенное фосфорилирование мембран СР. Обнаруженный фосфопродукт мембран СР обладает свойствами фосфоэфира и имеет белковую природу. Связанная с мембранами СР протеинкиназа проявляла активность в отношении экзогенного субстрата гистона H1. Фосфорилирование в присутствии гистонов не зависело от циклических нуклеотидов и от концентрации Mg2+ и Ca2+. Фракционирование солюбилизированных 32P-меченых мембран в полиакриламидном геле в присутствии DS-Na показало, что радиоактивность связана с зонами белков с молекулярными весами 95000 и 6000—8000.