БИОХИМИЯ, 1982, том 47, вып. 1, с. 3–12
УДК 577.158.4
Использование иммобилизации для изучения глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы. Иммобилизованные димеры фермента
Аннотация
Получены иммобилизованные димеры глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы после диссоциации тетрамерной молекулы фермента, связанной через одну из субъединиц с сефарозой 4B. Показано, что каталитические характеристики (V, Km и pH-зависимость активности) у иммобилизованных димеров и тетрамеров дегидрогеназы идентичны. Иммобилизованные димеры способны к реассоциации с субъединицами фермента из раствора и обладают большей стабильностью по сравнению с растворимой дегидрогеназой. Характер взаимодействия димеров с реагентами, вызывающими эффект «полуцентровой реактивности», свидетельствует, что иммобилизованные димеры глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы из дрожжей и скелетных мышц крысы не только обладают каталитической активностью, но и способны к проявлению кооперативных взаимодействий между активными центрами двух субъединиц. Иммобилизованные димеры дегидрогеназы из дрожжей обладают способностью к гибридизации с растворимыми модифицированными димерами фермента из дрожжей, а также с растворимыми димерами глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназ из других источников. Предложен метод выделения глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы из экстрактов тканей, основанный на гибридизации между иммобилизованными и растворимыми димерами гомологичных дегидрогеназ.