БИОХИМИЯ, 1981, том 46, вып. 11, с. 1970–1980
УДК 577.154
Изучение роли триптофана в ферментативной активности гистидиндекарбоксилазы из Micrococcus sp. n.
Лаборатория энзимологии АМН СССР, Москва
Поступила в редакцию 03.11.1980
Аннотация
Исследовано действие N-бромсукцинимида (БСИ) на гистидиндекарбоксилазу микрококка в 0,07 М фосфатном буфере, pH 5,6. На основании спектральных данных и аминокислотного анализа показано, что при 20-кратном молярном избытке БСИ происходит избирательная модификация трех из 12 имеющихся в молекуле остатков триптофана, приводящая к 80—85% потере ферментативной активности. Показано с помощью флуоресцентного метода и диск-электрофореза в полиакриламидном геле, что при модификации этих наиболее реактивных остатков триптофана не происходит структурных изменений фермента. Вероятно, остатки триптофана, ответственные за ферментативную активность, входят в активный центр фермента или расположены вблизи него. При 40—50-кратном молярном избытке БСИ модифицируется 6—9 остатков триптофана и 2—3 остатка цистеина. Остальные 3 остатка триптофана при этом не доступны действию БСИ. По-видимому, они расположены в глубине молекулы гистидиндекарбоксилазы. Максимум спектра флуоресценции белка при модифицировании 40—50-кратным молярным избытком БСИ смещается в длинноволновую область, указывая на конформационные изменения фермента. Полученные результаты позволяют считать, что молекула гистидиндекарбоксилазы содержит по меньшей мере 2 группы остатков триптофана с существенно различной реактивностью, выполняющие, очевидно, важную структурную и каталитическую роль. Показано ингибирующее действие ряда солей диазония на гистидиндекарбоксилазу микрококка. Проведены кинетические исследования, позволяющие сравнить ингибирующее действие этих соединений.