БИОХИМИЯ, 1981, том 46, вып. 6, с. 1026–1034
УДК 577.158.52
Ингибирование и инактивация пероксидазы из хрена тиомочевиной
Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 27.06.1980
Аннотация
Изучена кинетика катализируемого пероксидазой (КФ 1.11.1.7) из хрена окисления о-дианизидина перекисью водорода в присутствии тиомочевины. Показано, что тиомочевина на первой, быстрой стадии процесса является конкурентным обратимым ингибитором по отношению к о-дианизидину (Ki=0,22 мМ). По увеличению оптической плотности A495 и A638 фермента отмечено образование комплекса тиомочевины с пероксидазой. Константа диссоциации комплекса пероксидаза—тиомочевина равна 2,0—2,7 мМ. Показано, что тиомочевина не является специфическим субстратом пероксидазы в реакции окисления за счет Н2O2, но является оксидазным субстратом (хотя и малоактивным) пероксидазы. Изучена необратимая инактивация пероксидазы в процессе инкубации фермента с тиомочевиной. Показано, что константа скорости инактивации первого порядка (kин) увеличивается с уменьшением концентрации фермента. Зависимость kин от начальной концентрации тиомочевины описывается кривой с максимумом при 5—7 мМ концентрации тиомочевины. Инактивация фермента обусловлена его модификацией промежуточными свободнорадикальными продуктами окисления тиомочевины. Ингибиторы свободнорадикальных реакций (о-дианизидин) защищают фермент от инактивации. Степень инактивации зависит от концентрации тиомочевины и пероксидазы и от их соотношения. Обсуждается возможный механизм взаимодействия пероксидазы с тиомочевиной.