БИОХИМИЯ, 1981, том 46, вып. 5, с. 930–941
УДК 577.159
Определение молярного содержания креатинкиназы в митохондриях сердца с помощью SH-реагентов
Всесоюзный кардиологический научный центр АМН СССР, Москва
Поступила в редакцию 01.08.1980
Аннотация
В настоящей работе титрованием энзиматической активности креатинкиназы в подвергнутых старению митохондриях с помощью 5,5′-дитиобис-(2-нитробензоата) (ДТНБ) и 2,4-динитрофторбензола (ДНФБ) показано, что максимальное количество SH-реагента, необходимое для полной инактивации фермента, не превышает 2,5 моль на 1 моль цитохрома aa3. Равновесная смесь субстратов креатинкиназы, возникающая при инкубации митохондрий с 12 мМ фосфокреатином и 1—5 мМ ADP, существенно снижала скорость инактивации митохондриальной креатинкиназы ДТНБ и йодацетатом. Митохондрии, обработанные ДТНБ в отсутствие защитной смеси и в ее присутствии, подвергали вторичной обработке ДТНБ, регистрировали при этом количество дополнительно прореагировавших SH-групп и изменения креатинкиназной активности в обоих препаратах митохондрий. Разница в количестве модифицированных тиоловых групп в митохондриях с защищенными и незащищенными SH-группамн креатинкиназы коррелировала с разницей в изменении креатинкиназной активности и соответствовала количеству активных центров этого фермента, приходящемуся на 1 моль цитохром-c-оксидазы и равному 2,16±0,4 моль на 1 моль цитохрома aa3. Полученные данные позволяют заключить, что стехиометрическое соотношение креатинкиназы и АТР—ADP-транслоказы в митохондриях сердца близко к 1,0.