Фенилаланил-тРНК-синтетаза из Е. coli MRE-600. Влияние химической модификации остатков лизина на взаимодействие фермента с субстратами

Аннотация

Исследовано влияние модификации фенилаланил-тРНК-синтетазы (К.Ф.6.1.1.20) из Е. coli MRE-600 с помощью пиридоксаль-5′-фосфата, а также аналогов субстратов — ATP и L-фенилаланиниладенилата, окисленных перйодатом, на взаимодействие с субстратами. Показано, что модификация фермента с помощью пиридоксаль-P и o-ATP * приводит к уменьшению скорости реакции аминоацилирования и не влияет на скорость обмена ATP—[³²P] пирофосфат. Аналоги субстратов L-фенилаланинол и L-фенилаланиниладенилат увеличивают степень инактивации фермента в реакции аминоацилирования. тРНК в значительной степени защищает фермент от инактивации. ATP, как в отдельности (в случае модификации с помощью o-ATP), так и в присутствии Mg²⁺ и фенилаланина (в случае модификации с помощью пиридоксаль-P) также оказывает защитное влияние. Фенилаланин не защищает фермент от инактивации. K_дис комплекса синтетаза — [¹⁴C]Phe — тРНК^Phe увеличивается при модификации фермента с помощью пиридоксаль-P в — 2,5—5 раз, K_m для тРНК^Phe в реакции аминоацилирования уменьшается в ~2 раза. Величины K_m для ATP и L-Phe и коэффициенты Хилла для всех субстратов практически не изменяются. Модификация при помощи пиридоксаль-P приводит к уменьшению на 30—40% количества комплекса фермент — аминоациладенилат. Окисленный аналог аденилата o-L-фенилаланиниладенИлат не вызывает инактивации фермента ни в реакции аминоацилирования, ни в реакции обмена. Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии остатков лизина, важных для взаимодействия фермента с ATP и образования аминоациладенилата, и о наличии остатков, принимающих участие в узнавании и аминоацилировании тРНК.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: