БИОХИМИЯ, 1981, том 46, вып. 4, с. 681–690
УДК 547.963.32
Выделение и свойства двух ДНК-полимераз из клеток Bacillus stearothermophilus
Институт биологической физики АН СССР, Пущино
Поступила в редакцию 16.05.1980
Аннотация
Из клеток Вас. stearothermophilus выделены две ДНК-полимеразы (полимераза 1 и полимераза 2) и изучены некоторые их свойства. Процедура выделения включала удаление нуклеиновых кислот на ДЭАЭ-целлюлозе, аффинную хроматографию на ДНК-агарозе и хроматографию на ДЭАЭ-сефадексе. При этом ДНК-полимераза 1 очищена в 150 раз, имеет молекулярный вес 135 000 и оптимум pH 7,3, а ДНК-полимераза 2—95 000 и pH 9,0, соответственно, и очищена в 1000 раз. Эти полимеразы резко различаются по сродству к ДНК-агарозе и ДЭАЭ-сефадексу. В процессе очистки ДНК-полимераза 1 теряла термостабильность и превращалась в довольно лабильный фермент с температурным оптимумом при 40°. ДНК-полимераза 2 после очистки сохраняла высокую термостабильность. Лучшей матрицей-затравкой для обоих ферментов была ДНК, активированная ДНКазой 1. ДНК-полимераза 1 в отличие от полимеразы 2 чувствительна к SH-блокирующим агентам и высоким концентрациям солей, а также активируется в 1,5—2 раза 10%-ным этанолом.