БИОХИМИЯ, 1981, том 46, вып. 3, с. 552–568
УДК 577.154
Сравнительная характеристика множественных форм фосфофруктокиназы из мышц кролика
Научно-исследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений, Купавна Московской области
Поступила в редакцию 20.06.1980
Аннотация
Сравниваются некоторые свойства трех взаимопревращающихся форм фосфофруктокиназы из мышц кролика, полученных специфическим элюированием с ДЭАЭ-целлюлозы 10 мМ цитратом в 0,1 М трис-фосфатном буфере, pH 8,0 (I), 0,3 М буфером (II) и 1,5 М NaCl (III). I—III различаются по удельной активности, степени α-спирализации и седиментационным характеристикам. Кинетическое поведение I и III в 25 мМ глицилглициновом— β-глицерофосфатном буфере, pH 8,3, при ингибирующей концентрации ATP характеризуется двухфазной зависимостью скорости реакции от концентрации фруктозо-6-фосфата с nН = 1,0 и 2,3, но с разными V и [S]0,5 у обеих форм. При pH 6,8 для I типичны кинетические кривые с лаг-периодом, а для III — с «начальным всплеском». При этом форма I проявляет отрицательную кооперативность как по начальным, так и по стационарным скоростям при низких концентрациях субстрата. Стационарная скорость формы III характеризуется отрицательной кооперативностью во всем интервале концентраций субстрата. При pH 7,0 наблюдается ингибирование цитратом обеих форм фермента по начальным и стационарным скоростям, но с разными величинами Ki. Сложное кинетическое поведение фосфофруктокиназы соответствует ее сложному седиментационному и хроматографическому поведению. Множественность форм фермента связана, по-видимому, со сложным набором олигомеров и конформеров фермента, с гистерезисным характером переходов между ними, а также с фосфорилированностью фосфофруктокиназы и связыванием лигандов.