БИОХИМИЯ, 1981, том 46, вып. 2, с. 280–286
УДК 577.158
Тепловая и протеолитическая инактивация цитохрома P-450
2-й Московский государственный медицинский институт им. Н.И. Пирогова
Институт химической физики АН СССР, Москва
Поступила в редакцию 29.02.1980
Аннотация
Исследовалась тепловая и протеолитическая инактивация трех форм цитохрома P-450— микросомального, изолированного растворимого и встроенного в мембрану липосом. Показано, что восстановленный цитохром P-450 гораздо менее стабилен, чем его окисленная форма. Реакция инактивации гемопротеида при 37° в 100 мМ трис-HCl-буфере, pH 7,6, имеет второй порядок, константа скорости составляет 6,3·105 М-1 мин-1. При введении в инкубационную смесь различных соединений (глицерин, дитиотреитол, ЭДТА, субстраты I и II типов) обнаружено, что способностью замедлять инактивацию восстановленного цитохрома P-450 обладали только 20%-ный глицерин и 3 мМ диметиланилин. Цитохром P-450 микросомальной мембраны термостабилен. Встраивание гемопротеида в мембраны липосом из яичного лецитина и микросомального фосфолипида сопровождалось снижением скорости перехода восстановленной активной формы цитохрома P-450 в неактивную форму — цитохром P-420. Особенно выраженным эффект стабилизации цитохрома P-450 был в случае его встраивания в липосомы, полученные из микросомального фосфолипида. При исследовании инактивирующего действия проназы на цитохром P-450 показано, что оно почти полностью исчезало в присутствии 20%-ного глицерина. Добавление глицерина к цитохрому P-450, предварительно инактивированному проназой, приводило к частичной реконверсии цитохрома P-420 в цитохром P-450. При изучении влияния протеолитической инактивации цитохрома P-450 на его функциональную активность было обнаружено, что даже при полной конверсии цитохрома P-450 в цитохром P-420 сохранялась на 50% способность последнего катализировать N-деметилирование диметиланилина, в то время как полностью терялась его O-деалкилазная активность по отношению к n-нитроанизолу.