Активность 3-гидрокси-3-метилглутарил-CoA-редуктазы, ацетил-CoA-карбоксилазы и скорость биосинтеза мевалоновой кислоты, сквалена, стеринов и жирных кислот из [1-¹⁴C]ацетил-CoA и [2-¹⁴C]малонил-CoA в печени крысы: изменение в зависимости от времени суток

Аннотация

Исследована активность 3-гидрокси-3-метилглутарил-CoA-редуктазы (ГМГ-CoA-редуктазы) и скорость синтеза мевалоновой кислоты (МВК) из [1-¹⁴C] ацетил-CoA и [2-¹⁴C] малонил-CoA в растворимой (140000 g) и микросомной фракциях печени крысы, а также в реконструированной системе, содержащей растворимую фракцию и микросомы. Прослежено изменение активности ГМГ-CoA-редуктазы и скорости биосинтеза МВК в этих фракциях в зависимости от времени суток. Исследованы суточные биоритмы скорости включения ацетил-CoA и малонил-CoA в сквален, стерины и жирные кислоты в постмитохондриальной фракции, а также суточные колебания активности ацетил-CoA-карбоксилазы в растворимой фракции печени крыс. Сопоставление величины включения меченых ацетил-CoA и малонил-CoA в МВК показало, что МВК может синтезироваться из обоих субстратов как в растворимой, так и в микросомной фракциях. Малонил-CoA является предпочтительным субстратом для биосинтеза МВК в растворимой фракции. Синтез МВК из ацетил-CoA идет с большей скоростью в интактных и солюбилизированных микросомах, чем в растворимой фракции. Активность ГМГ-CoA-редуктазы обнаружена в растворимой фракции и в микросомах и примерно одинакова по величине. Активность фермента возрастает в макросомной фракции после ее солюбилизации. Установлено, что скорость биосинтеза МВК из ацетил-CoA и активность ГМГ-CoA-редуктазы в растворимой фракции мало подвержены изменениям в течение суток. Активность ГМГ-CoA-редуктазы и скорость биосинтеза МВК из ацетил-CoA в интактной и солюбилизированной микросомной фракциях имеют максимальную величину в середине темнового периода. Скорость биосинтеза МВК из малонил-CoA снижена в середине темнового периода во всех фракциях и имеет максимальное значение в середине освещенного периода. Наблюдается совпадение суточных биоритмов активности ацетил-CoA-карбоксилазы в растворимой фракции и скорости биосинтеза МВК из малонил-CoA во всех фракциях. Сравнительное исследование включения постмитохондриальной фракцией ацетил-CoA и малонил-CoA в общую неомыляемую фракцию липидов, в ее компоненты — сквален, ланостерин и холестерин, выделенные тонкослойной хроматографией, а также в стерины, осажденные дигитонином, показало, что включение малонил-CoA в общую неомыляемую фракцию липидов было выше, чем включение ацетил-CoA. Однако ацетил-CoA значительно лучше включался в стерины, осажденные дигитонином или тонкослойной хроматографией, чем малонил-CoA. Скорость включения ацетил-CoA в общую неомыляемую фракцию липидов, а также в сквален, ланостерин и холестерин была максимальной в середине темнового периода и минимальной в середине освещенного. Скорость включения малонил-CoA в те же продукты была, напротив, наиболее низкой в середине темнового периода и максимальной в середине освещенного. Скорость биосинтеза жирных кислот из ацетил-CoA имела два подъема — в середине освещенного и в середине темнового периодов. Скорость включения малонил-CoA в жирные кислоты не изменялась в течение суток. Полученные данные свидетельствуют о существовании в печени крысы двух форм ГМГ-CoA-редуктазы: одной, локализованной в растворимой фракции, и второй — во фракции микросом, и двух путей биосинтеза МВК — «тиолазного» и «карбоксилазного». Результаты исследования подтверждают возможность существования пути биосинтеза сквалена и стеринов через стадию образования малонил-CoA.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: