БИОХИМИЯ, 1981, том 46, вып. 1, с. 62–69
УДК 577.153
О влиянии дигитонина на активность Na,K-ATPазы из мозга быка
Научно-исследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений, Купавна Московской области
Биологический факультет Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 18.02.1980
Аннотация
Изучены кинетические свойства Na,K-ATPазы из мозга быка в норме и после обработки дигитонином. Температурная зависимость скорости гидролиза АТР в оптимальных условиях (v0) в координатах Аррениуса имеет перегиб при 19—20°. В той же области обнаруживается перегиб на графике температурной зависимости Km‘ и Km”, тогда как график Аррениуса для максимальной скорости реакции (V) линеен. Коэффициент Хилла (nH) для АТР при 37° имеет различные значения при разных концентрациях ATP: он меньше 1, если концентрация ATP не превышает 50 мкМ, и возрастает до 3,2 при более высоких концентрациях субстрата. Коэффициент Хилла, определенный в области высоких концентраций субстрата, меняется с изменением температуры, снижаясь до 2,1 при понижении температуры до 23°, а затем снижаясь до 1 в температурном интервале 21 — 19°. Дальнейшее понижение температуры мало сказывается на величине nH. Дигитонин необратимо ингибирует, Na,K-ATPазу. Гидролиз ATP более чувствителен к действию этого детергента, чем гидролиз n-NPP: при полном ингибировании ATPазы сохраняется еще ~40% фосфатазной активности. После обработки Na,K-ATPазы дигитонином изломы на графике Аррениуса для значений v0,Km‘ и Km” устраняются, а температурная зависимость V остается линейной. Одновременно дигитонин устраняет положительную кооперативность фермента для ATP. Высказывается предположение, что Na,K-ATPаза мозга быка является олигомером, имеющим состав (αβ)4. Дигитонин изменяет характер взаимодействий между протомерами в олигомерном комплексе, влияя на свойства липидного окружения фермента или на характер белок-липидных взаимодействий.