Изучение связывания α- и βγ-тромбина с гепарином методом разностной спектроскопии в ультрафиолетовой области

Аннотация

Взаимодействие α- и βγ-тромбина с гепарином изучали методом раз­ностной УФ-спектроскопии в диапазоне 230—300 нм. Величина разностного поглощения комплекса тромбин — гепарин отрицательна и имеет 2 макси­мума: при 255 нм (5300 М⁻¹см⁻¹) и 282 нм (4700 М⁻¹см⁻¹) в спектре α-тромбина и при 240 нм (4900 М⁻¹см⁻¹) и 282 нм (4100 М⁻¹см⁻¹) в спект­ре (βγ-тромбина. Предполагается, что конформационный сдвиг, происходя­щий в молекуле тромбина при взаимодействии с гепарином, сопровож­дается выходом нескольких остатков триптофана и тирозина на поверх­ность молекулы. Изменения оптической плотности, сопровождающие взаи­модействие α-тромбина с гепарином при физиологической ионной силе, свидетельствуют о связывании нескольких молекул α-тромбина одной мо­лекулой гепарина при молярном отношении лиганд/фермент меньше 1. βγ-Тромбин в этих условиях образует с гепарином эквимолярный комп­лекс с K_дис 7,0⋅10⁻⁹ М. Увеличение ионной силы (до 0,217 М NaCl) при­водит к некоторому нарушению связывания α-тромбина с гепарином и препятствует связыванию дополнительных молекул α-тромбина комплексом α-тромбин— гепарин; вследствие этого наблюдается сходство кинетики взаимодействия обеих форм фермента с гепарином, причем α-тромбин свя­зывается с гепарином с несколько большим сродством. Полученные данные позволяют считать, что связывание тромбина с гепарином играет важную роль в процессе биологической инактивации тромбина.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: