БИОХИМИЯ, 1980, том 45, вып. 11, с. 1923–1933
УДК 577.153.3
Взаимодействие фосфорилазы Б с SH-реагентами и изучение свойств модифицированного фермента
Кафедра биохимии Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 25.01.1980
Аннотация
Изучено взаимодействие фосфорилазы Б с SH-реагентами, 2-хлормеркури-4-нитрофенолом и этилмеркурихлоридом и показано, что фосфорилаза Б ингибируется по типу реакции псевдопервого порядка; константы скорости инактивации соответственно равны 11 и 17,5 М−1с−1. На основании данных титрования SH-групп с помощью 2-хлормеркури-4-нитрофенола и n-хлормеркурибензоата количество модифицированных остатков цистеина и количество связанного 2-хлормеркури-4-нитрофенола в димере фосфорилазы Б равно двум. В модифицированной фосфорилазе Б снижается максимум поглощения пиридоксальфосфата при 330 нм и увеличивается при 410 нм. Связывание 2-хлормеркури-4-нитрофенола сопровождается тушением флуоресценции белка и кофермента. При взаимодействии с этилмеркурихлоридом тушится только флуоресценция пиридоксальфосфата. Увеличение подвижности спин-метки в модифицированном ферменте, рассчитанное из спектров ЭПР спин-меченых препаратов, указывает на изменение конформации белка, связанное с блокированием одной SH-группы в мономере фосфорилазы Б. Скорость инактивации фермента под действием SH-реагентов является функцией pH и заметно возрастает в области pH 5,7—6,7. pH-Оптимум активности частично модифицированной фосфорилазы Б практически не изменяется, но по сравнению с нативным ферментом наблюдается более сильное падение активности в кислой от pH-оптимума области. Полученные данные позволяют считать, что инактивация фермента обусловлена модификацией одной SH-группы в мономере фосфорилазы Б, расположенной вблизи связывания пиридоксальфосфата и, возможно, принимающей участие в ферментативной реакции.