БИОХИМИЯ, 1980, том 45, вып. 10, с. 1871–1880
УДК 577.152,577.166.
Сериновая протеиназа Thermoactinomyces vulgaris шт. ИНМИ-4а
Химический факультет Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова
Институт микробиологии АН СССР, Москва
Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов, Москва
Поступила в редакцию 27.12.1979
Аннотация
Из культуральной жидкости термофильного актиномицета Thermoactinomyces vulgaris шт. ИНМИ-4а выделена сериновая протеиназа. Схема очистки включает аффинную хроматографию на бацитрацин-сефарозе, ионообменную хроматографию на аминосилохроме и гель-фильтрацию на сефадексе G-25. В результате была достигнута 194-кратная очистка и получен чистый фермент с выходом 55%. Молекулярный вес фермента равен 28000, аминокислотный состав: Lys11, His4, Arg5, Asp33, Thr22, Ser24, Glu16, Pro16, Gly30, Ala38, Cys1-2, Val20, Met1, Ile14, Leu8, Tyr16, Phe4. Trp6_7. Фермент имеет изоэлектрическую точку в диапазоне 8—9, оптимум протеолитического действия по расщеплению специфического субстрата сериновых протеиназ Z-L-Ala-L-Ala-L-Leu-pNA лежит при pH 8,2. Фермент наиболее стабилен в области pH 7—9. Температурный оптимум находится при 55°, протеиназа устойчива при нагревании в течение 1 ч при 37°. Фермент из Th. vulgaris шт. ИНМИ-4а полностью ингибируется специфическими ингибиторами сериновых протеиназ — фенилметилсульфонилфторидом и белковым ингибитором ИТ-AjT из Str. janthinus, а также n-хлормеркурбензоатом. Инактивация фермента как типичными ингибиторами сериновых протеиназ, так и реагентом на сульфгидрильную группу, сближает его с сериновыми протеиназами семейства карбоксипептидазы Y из дрожжей. Протеиназа обладает литическим действием на клетки Е. coli, Micrococcus lysodeicticus и дрожжей.