БИОХИМИЯ, 1980, том 45, вып. 9, с. 1710–1714
Краткие сообщения
УДК 547.963 + 577.15
Простой способ обогащения фракции ДНК по содержанию уникальных генов
Лаборатория энзимологии белкового синтеза Института молекулярной биологии АН СССР, Москва
Поступила в редакцию 26.02.1980
Аннотация
Проблема выделения индивидуальных генов является одной из важных задач молекулярной биологии. Обогащение по интересующим последовательностям можно осуществлять либо раздельным выделением одноцепочечных молекул ДНК. с последующим их отжигом [1, 2], либо с сохранением двуцепочечной структуры ДНК. Последний метод развит преимущественно в двух вариантах. В одном случае создают «бреши» в структуре двутяжевой ДНК, гибридизуют с данной РНК, выделяют полученный комплекс и восстанавливают исходную структуру с помощью ДНК-полимераз. Несмотря на высокую эффективность этого способа, его применение требует набора высокоочищенных ферментов [3]. Второй вариант основан на образовании структур типа R-петля; при высокой концентрации формамида термостабильность гибридного комплекса РНК : ДНК становится выше, чем дуплекса ДНК : ДНК, поэтому при отжиге РНК с ДНК в растворе с высокой концентрацией формамида РНК может вытеснять одну из цепей ДНК, гибридизуясь с комплементарной цепью [4, 5]. Образование R-петли зависит как от нуклеотидного состава последовательностей ДНК, комплементарных РНК, так и от нуклеотидного состава прилегающих последовательностей, т. е. носит индивидуальный характер.