Конформация и тепловая стабильность растворимого и встроенного в мембрану липосом цитохрома P-450

Аннотация

Исследована вторичная структура цитохрома Р-450 в водном растворе и встроенного в липосомы из яичного лецитина и микросомального липида. Методами кругового дихроизма (КД) и инфракрасной спектроскопии показано, что в цитохроме Р-450 60% пептидных групп образуют правую α-спираль и около 40% — неупорядоченную конформацию. Незначительное увеличение содержания α-спирали в растворимом цитохроме Р-450 наблюдается при связывании гемопротеида с субстратами типа II (октиламином и диаминооктаном). Неполярные субстраты типа I (гексан и циклогексан) не изменяют конформационного состояния изолированного фермента. Вторичная структура цитохрома Р-450, встроенного в искусственные мембраны из фосфатидилхолина и микросомального фосфолипида, незначительно отличается от таковой в растворе. Связывание субстратов типов I и II с цитохромом Р-450, встроенным в лецитиновые липосомы, а также в липосомы из микросомального липида, согласно данным КД, не сопровождается конформационными изменениями в полипептидной цепи макромолекулы. Восстановление железа гема цитохрома Р-450 приводит к увеличению α-спирали в белке на 10% в случае растворимого и 5% — в случае встроенного в мембрану липосом гемопротеида. Методом КД изучена тепловая стабильность растворимого и встроенного в липосомы цитохрома Р-450 в зависимости от pH. Эффективные значения энтальпии и температуры перехода растворимого цитохрома Р-450 для значений pH 6,9, 7,6 и 7,9 составляют 78, 80, 78 ккал/моль и 47,7, 45,2 и 42,4° соответственно. Фермент, встроенный в фосфолипидные везикулы, значительно стабильнее—нагревание его сопровождается слабовыраженным кооперативным переходом в отличие от хорошо выраженного перехода, характерного для растворимого цитохрома.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: