БИОХИМИЯ, 1980, том 45, вып. 6, с. 1133–1145
УДК 547.96
Взаимодействие гистонов с ДНК в хроматине. Новый метод ковалентного связывания гистонов с ДНК, удобный для их локализации на ДНК
Институт молекулярной биологии АН СССР, Москва
Поступила в редакцию 02.10.1979
Аннотация
Разработан новый метод ковалентного связывания гистонов с частично апуринизированной ДНК. При частичной апуринизации метилированной в составе хроматина ДНК в местах апуринизации образуются альдегидные группы, реагирующие с ε-аминогруппами лизиновых остатков белков хроматина. Образующиеся в результате реакции основания Шиффа ковалентно и обратимо связывают молекулы белков с ДНК. Ковалентное связывание сопровождается специфическим одноцепочечным расщеплением ДНК в месте пришивки таким образом, что только образовавшийся 5′-концевой фрагмент ДНК связывается с белком. Эти сшивки можно стабилизировать, восстановив основания Шиффа боргидридом натрия. Определение размера пришитого 5′-концевого фрагмента ДНК позволяет локализовать место пришивки и вместе с тем положение молекулы белка на ДНК. Предлагаемый метод сшивки «нулевой длины» фиксирует непосредственные взаимодействия ДНК с белками и может быть широко использован для изучения контактов белок — ДНК, если молекулы белка взаимодействуют с ДНК ε-аминогруппами лизиновых остатков.