pH-зависимость гидролиза этилового эфира триптофана, катализируемого α-химотрипсином

Аннотация

Изучен гидролиз этилового эфира L-триптофана, катализируемый α-химотрипсином, и влияние этилового эфира D-триптофана на протекание ре­акции. Предложена кинетическая схема трехстадийной pH-зависимой фер­ментативной реакции, предполагающая, что реакционноспособным является только комплекс фермента с протонированной формой субстрата. Показано, что лимитирующей стадией ферментативной реакции является образование промежуточного ацилфермента. Кривая pH-зависимости бимолекулярной константы k_кат/К_m ферментативного гидролиза этилового эфира L-трипто­фана имеет колоколообразный вид и описывается схемой, включающей ионизацию двух групп с величинами рК_а 7,0±0,1 и 7,5±0,1; величина рК_a 7,5±0,1 отнесена к ионизации субстрата (значение рК^s_a аминогруппы эти­лового эфира L-триптофана составляет 7,6). Из ступенчатой зависимости величины константы Михаэлиса ферментативной реакции от pH определены значения констант связывания ферментом протонированной и непротонированной форм субстрата. При анализе колоколообразной рН-зависимости каталитической константы ферментативного гидролиза определены значения рК ионогенных групп фермент-субстратного комплекса (рК_a‘ 6,8±0,1 и рК_a”7,3±0,1).

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: