Выделение гистонов из ядер простейшего Astasia longa

Аннотация

Разработан новый препаративный метод выделения очищенной фрак­ции ядер из клеток жгутиконосца Astasia longa (подкласс Phytoflagellata). Полученные препараты охарактеризованы по химическому составу. С учетом особенностей обмена веществ жгутиконосца разработан метод получения суммарных препаратов гистонов из ядерной фракции A. longa. Для получе­ния чистых гистоновых препаратов необходимо интенсивное разрушение и исчерпывающее отмывание ядерной фракции от негистоновых белков сла­быми солевыми растворами. В процессе отмывания происходит интенсивный протеолиз гистонов, для подавления которого необходимо применение при pH 7,8—8,0 специфических ингибиторов протеиназ — фенилметилсульфанил­фторида и n-хлормеркурибензоата. Применение NaHSO₃ или кипячения ядерной фракции для подавления протеолиза гистонов не эффективно. Экстракция гистонов 1 М CaCl₂ оказалась значительно более результатив­ной, чем при использовании растворов минеральных кислот. Выделенный в оптимальных условиях суммарный препарат гистонов содержится в хрома­тине в количестве, эквивалентном ДНК, и имеет характерный для гистонов аминокислотный состав. При электрофорезе в полиакриламидном геле в кислой системе с мочевиной гистоны делятся на 4 основные зоны, а в присут­ствии DS-Na — на 5 зон. По аминокислотному составу и электрофоретиче­ским свойствам в различных системах гистоны A. longa близки, но не иден­тичны гистонам тимуса теленка.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: