Свойства аминогликозид-з'-фосфотрансфераз, детерминируемых канамициновыми транспозонами Tn601 и Tn5

Аннотация

Из клеток Е. coli с плазмидами R6 и JR67 выделены и очищены до го­могенного состояния аминогликозид-З’-фосфотрансферазы I и II (АФТ-3′-I и АФТ-З’-II соответственно). При очистке ферментов использовали конку­рентную аффинную хроматографию на неомицин-сефарозе н гель-фильтра­цию через сефадекс G-100. Удельная активность АФТ-З’-I с субстратами ливидомицином А, неомицином В, паромомицином, рибостамицином, канамицинами А и В составляет 4,3, 2,8, 2,1, 1,6, 0,9 и 0,8 мкмоль фосфорилированного антибиотика на 1 мг белка в 1 мин. Удельная активность АФТ-З’-II с субстратами рибостамицином, паромомицином, канамицинами А и В, неомицином В составляет 8,0, 7,2, 4,0, 4,5 и 3,6 соответственно. Для активности АФТ-З’-I и АФТ-З’-II необходимы катионы Mg²⁺. В случае АФТ-З’-I ак­тивны также Со²⁺, Zn²⁺ и Mn²⁺, однако эти катионы менее эффективны, чем Mg²⁺. Максимальная активность АФТ-З’-I и АФТ-З’-II наблюдается в интервале pH 7,0—7,5 и при наличии высокой ионной силы буфера. Молекуляр­ные веса АФТ-З’-I и АФТ-З’-II равны 36000 и 26000 соответственно. Опре­делен аминокислотный состав обоих ферментов. Оба фермента содержат остатки триптофана, интенсивность флуоресценции которых уменьшается при добавлении АТР, но не аминогликозидных антибиотиков. Обсуждается связь между молекулярными весами этих ферментов и размерами петель транспозонов Tn601 и Tn5, кодирующих синтез АФТ-З’-I и АФТ-З’-II со­ответственно.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: