Изучение физико-химических свойств протеолитического фермента террилитина, модифицированного сополимером на основе винилпирролидона

Аннотация

Протеолитическая активность фермента террилитина, продуцируемого культурой Asp. terricola; модифицированного водорастворимым сополиме­ром винилпирролидона и акролеина, сохранялась после модификации. Ме­тодом микротонкослойной хроматографии показано, что в реакцию с аль­дегидными группами полимерной матрицы вступает значительная доля ε-аминогрупп остатков лизина в белке. Исследование седиментационного и диффузионного поведения полимерферментного аддукта показало, что молекулярная масса модифицированного фермента равна сумме молеку­лярных масс составляющих его компонентов. На основании данных вис­козиметрии и гель-проникающей хроматографии предложена гидродинами­ческая модель макромолекулярного продукта. Показано, что скорость инак­тивации фермента в растворе, рассчитываемая по уравнению реакции пер­вого порядка, зависит от природы его электрохимического микроокруже­ния. В условиях, близких к физиологическим, константа скорости инакти­вации террилитина, модифицированного нейтральной полимерной матрицей, в 10 раз ниже константы скорости инактивации нативного фермента. В изоэлектрической точке (pH 4,6) наиболее стабильна положительно заряжен­ная полимерная форма террилитина. Оптимумы pH и температуры для гидролиза казеина не изменялись в процессе полимерной модификации. По­лимерная оболочка не оказывала диффузионных затруднений при подходе субстратов (казеина и инсулина) к молекуле террилитина в процессе ка­талитического акта, что выражается в постоянстве констант Михаэлиса. Модификация террилитина сополимером приводит к повышению устойчи­вости по отношению к протеолизу трипсином, а также к уменьшению срод­ства к ингибиторам сыворотки крови человека. Кажущиеся константы ингибирования для модифицированных форм фермента не зависят от при­роды электрохимического микроокружения и в 10 раз превышают кон­станту для нативного террилитина.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: