БИОХИМИЯ, 1980, том 45, вып. 3, с. 398–407
УДК 577.31
Хроматография, делипидирование и образование рекомбинантов родопсина минтая
Институт биологии моря Дальневосточного научного центра АН СССР, Владивосток
Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова
Московский институт тонкой химической технологии
Поступила в редакцию 20.03.1979
Аннотация
Использование 100 мМ бромида додецилтриметиламмония в качестве солюбилизирующего агента родопсина минтая приводит к быстрому спонтанному обесцвечиванию исходного препарата. При хроматографии родопсина, солюбилизированного 100 мМ N‑окисью N′,N′-диметилдодециламина, наблюдали 30–50%‑ный выход окрашенного «темпового» препарата. Остальная часть препарата родопсина делипидировалась до 5–40 моль фосфолипидов на 1 моль родопсина, практически полностью обесцвечивалась и агрегировала. Родопсин необратимо сорбировался на гидроксилапатите, но выходил из колонки с агарозой А перед окрашенным «темновым» препаратом. Удовлетворительные результаты были получены после солюбилизации родопсина в 1–2%‑ном холате натрия. При хроматографии родопсина минтая с этим детергентом на агарозе А наблюдали 80–90%‑ный выход окрашенного «темнового» препарата, значительное удаление липидов (до 1–5 моль фосфолипидов на 1 моль родопсина) и незначительное обесцвечивание в процессе хроматографии. Однако способность к регенерации и термостабильность такого делипидированного препарата снижалась почти в 2 раза по сравнению с исходным, содержащим до 100 моль фосфолипидов на 1 моль родопсина. Удаление основной массы холата натрия диализом при 0–2° и одновременное введение природных и синтетических фосфолипидов позволило получить бездетергентные рекомбинанты (протеолипосомы) родопсина минтая. Введение липидов на фоне удаленного детергента вызывало увеличение температурной стабильности родопсина в рекомбинантах до значений, характерных для родопсина в нативной мембране наружных сегментов палочек сетчатки.