БИОХИМИЯ, 1980, том 45, вып. 2, с. 363–370
УДК 577.156
Протеолиз как подход к изучению расположения белков в мембране Micrococcus lysodeikticus
Институт биохимии им. А.Н. Баха АН СССР, Москва
Поступила в редакцию 14.06.1979
Аннотация
Протопласты М. lysodeikticus обрабатывали субтилизином или проназой, не нарушающими их проницаемости: в результате переваривалось 20—30% белка и с помощью DS-электрофореза мембран, выделенных из протопластов, отмечалось исчезновение 3 белков. На основании этих данных делается вывод, что на наружной поверхности протопластов М. lysodeikticus расположено 3 белка, поддающихся атаке протеиназ. Эти белки не являются ферментами дыхательной цепи. При обработке протеиназами выделенных осмотическим шоком мембран М. lysodeikticus переваривается 20—50% белка. Агенты, нарушающие взаимодействия между компонентами мембран (уменьшение концентрации ионов Mg2+, ультразвук, КCl, ЭДТА и особенно детергенты), способствовали более глубокому протеолизу, но тем не менее большая часть белков оставалась в состоянии, не поддающемся действию протеиназ. Только мембраны, предварительно обработанные DS-Na или хлороформом с метанолом, являлись хорошим субстратом для протеиназ. Обработка фракции мембран протеолитическими ферментами позволила сделать некоторые выводы о степени погружения в строму мембраны ферментов дыхательной цепи М. lysodeikticus. Так, цитохром c расположен ближе к поверхности по сравнению с цитохромами a и b, а дегидрогеназа малата утоплена в строму мембраны в большей степени, чем дегидрогеназа NADH.