Липид-белковые нанодиски: возможность применения для ЯМР-исследований мембранных белков и мембраноактивных пептидов^*

Аннотация

Показана возможность использования спектроскопии ЯМР высокого разрешения для исследования мембранных белков и мембраноактивных пептидов, встроенных в липид-белковые нанодиски (ЛБН). ¹⁵N-Меченные аналоги бактериального калиевого канала KcsA (Streptomyces lividans) и антибиотика антиамебина 1 (Аам-1, Emericellopsis minima) встроены в мембраны ЛБН различного состава. Формирование стабильных комплексов, демонстрирующих изотропное вращение в растворе, подтверждено методами гель-фильтрации и ³¹P-ЯМР-спектроскопии. Для KcsA в составе ЛБН на основе DMPC и для Аам-1 в составе ЛБН на основе DOPG, DLPC, DMPC и POPC измерены ¹H-¹⁵N-корреляционные двумерные спектры и проведено их сравнение со спектрами в детергентсодержащих мицеллах и небольших бицеллах, традиционно используемых для ЯМР-исследований мембранных белков. В спектрах ЯМР, полученных в ЛБН, продемонстрирована сравнимая дисперсия сигналов и значительно бóльшая ширина линий ¹H_N. В спектрах Аам-1 в составе ЛБН, содержащих липиды на основе фосфатидилхолина, продемонстрировано значительное избирательное уширение сигналов, свидетельствующее о наличии обменного(ых) процесса(ов) между несколькими мембраносвязанными состояниями пептида. Эффективное время корреляции вращательных движений Аам-1 (~40 нс при 45°), рассчитанное из скоростей релаксации ядер ¹⁵N, свидетельствует о наличии дополнительных степеней свободы у пептида в составе комплекса с ЛБН.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: