Структурные и кинетические особенности неорганической пирофосфатазы семейства I из Vibrio cholerae^*

Аннотация

Охарактеризованы кинетические свойства и описана кристаллическая структура апоформы растворимой неорганической пирофосфатазы семейства I из Vibrio cholerae (V-РРазы) – кишечного патогена человека, возбудителя холеры. Гидролитическая активность V-РРазы исследована в зависимости от рН, концентрации ионов металлов-кофакторов (Mg²⁺ и Mn²⁺) и ионной силы. Обнаружено, что, несмотря на высокое сходство аминокислотных последовательностей бактериальных РРаз семейства I, V-РРаза отличается по некоторым свойствам от других представителей этого семейства. Показано, что константы диссоциации комплексов V-РРазы с ионами металлов-кофакторов Mg²⁺ и Mn²⁺ практически не отличаются от констант для РРазы Escherichia coli (Е-РРазы). рН-Оптимум гидролиза MgPP_i для V-РРазы сдвинут в щелочную область за счет более высоких значений рК_а титруемых групп свободного фермента и фермент-субстратного комплекса. Исследована стабильность гексамерной формы V-РРазы в зависимости от рН. Установлено, что соответствующее значение рК_а группы, контролирующей стабильность гексамера при рН < 6 (рК_а = 4,4), значительно ниже, чем для других гексамерных РРаз. Кристаллическая структура, представленная в работе, обсуждается в сравнении со структурой Е-РРазы. Проанализировано расположение аминокислотных остатков, различающихся в структурах V-РРазы и Е-РРазы. В отличие от Е-РРазы V-РРаза сохраняет гидролитическую активность в растворах с высокой ионной силой. Эта и другие наблюдаемые структурные и кинетические особенности V-РРазы обсуждаются в свете возможной осмоадаптации белка.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: