БИОХИМИЯ, 2009, том 74, вып. 6, с. 853–859
УДК 577.151.03, 577.151.45
Сравнение иммобилизованной и растворимой биферментных систем НАДН: ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза
1 Институт биофизики СО РАН
2 Сибирский федеральный университет
Поступила в редакцию 23.03.2008
После доработки 07.07.2008
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: биолюминесценция, иммобилизация, термостабильность, люцифераза, крахмал, желатин.
Аннотация
Изучены свойства биферментной системы светящихся бактерий НАДН:ФМН-оксидоредуктаза и люцифераза при совместной иммобилизации ферментов и субстратов в полимерные гели различной природы: крахмальный (полисахаридный) и желатиновый (полипептидный). Максимальная активность (100% выход активности иммобилизованных ферментов) достигается при использовании крахмального геля. По сравнению с растворимыми ферментами наблюдается увеличение константы Михаэлиса при иммобилизации как в крахмальный, так и желатиновый гель. При этом повышается устойчивость биферментной системы НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза к химическим и физическим факторам среды: рН-оптимум расширяется как в кислую, так и щелочную области, сохраняется высокая активность при увеличении концентраций солей, повышается термостабильность. Наибольшей термостабильностью отличается иммобилизованная в крахмальный гель биферментная система, для которой энергия активации составляет 30 кДж/моль. Полученные результаты являются основой для получения высокоактивного и стабильного реагента для биолюминесцентного анализа.
Текст статьи
Сноски
* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.