Сафранин O как флуоресцентный индикатор мембранного потенциала митохондрий: исследование на уровне суспензии и уровне отдельных митохондрий^*

Аннотация

Проникающий катионный краситель сафранин O часто используется для измерения потенциала выделенных митохондрий в силу зависимости его поглощения и флуоресценции от энергизации митохондрий, связанной с его способностью к олигомеризации при энергозависимом накоплении внутри митохондрий. Был применен метод флуоресцентной корреляционной спектроскопии (FCS) для регистрации изменений флуоресценции на микроуровне, т.е. в условиях разрешения вкладов от отдельных частиц (молекул красителя и окрашенных митохондрий). При высокой концентрации сафранина O (10 мкМ) в ответ на энергизацию наблюдалось уменьшение сигнала флуоресценции от суспензии энергизованных митохондрий, связанное с уменьшением концентрации красителя в растворе и его накоплением внутри митохондриальных частиц, приводящим к самотушению. При концентрации сафранина O 1 мкМ в ответ на энергизацию, напротив, происходило увеличение сигнала флуоресценции, которое вызвано накоплением красителя внутри митохондрий в концентрации недостаточной для полного самотушения, а также возрастанием квантового выхода флуоресценции при попадании красителя в гидрофобное окружение. Показано, что данный подход, наряду с оценкой величины потенциала внутренней мембраны митохондрий, позволяет также оценивать концентрацию флуоресцирующих частиц. Немонотонная зависимость параметра G(τ→0) от концентрации митохондриального белка свидетельствует о гетерогенности популяции частиц в системе по яркости. Важным преимуществом метода FCS является его высокая чувствительность, позволяющая проводить измерения, используя малые количества митохондриального белка в пробе (менее 10 мкг).

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: