БИОХИМИЯ, 2009, том 74, вып. 6, с. 768–778
УДК 577.152.1
Направленный мутагенез цитохрома c: реакции с компонентами дыхательной цепи и супероксид-радикалом*
1 Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН
2 Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова
3 Митоинженерный центр МГУ им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 13.11.2008
После доработки 23.12.2008
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: цитохром c, сайт-направленный мутагенез, комплекс I, дыхательная цепь, супероксид-радикал, перекись водорода, митохондрии.
Аннотация
Получено три мутантных варианта цитохрома c сердца лошади с заменами аминокислотных остатков в окружении гемовой впадины, обеспечивающих его специфическое связывание с митохондриальной убихинол:цитохром c-редуктазой (комплексом III) и цитохром c-оксидазой (комплексом IV), и изучены реакции этих белков с супероксид-радикалом, генерируемым NADH:убихинон-редуктазой субмитохондриальных частиц (комплексом I). Мутантные варианты с шестью заменами (К27Е/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е/Е90К и К8Е/Е62К/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е) и восемью заменами (К8Е/К27Е/Е62К/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е/Е90К) неактивны в цитохром c-оксидазной реакции, а их способность восстанавливаться в убихинол:цитохром c-редуктазной реакции ниже, чем у ацетилированного цитохрома c и составляет не более 3% по сравнению с нативным цитохромом c. Восстановление мутантных вариантов цитохрома c при генерации супероксид-радикала комплексом I почти полностью (до 90%) подавляется супероксиддисмутазой. Такие цитохромы c могут быть использованы для количественного анализа генерации супероксид-радикала препаратами митохондриальной дыхательной цепи. Сравнение скоростей генерации перекиси водорода и супероксид-радикала свидетельствует о прямом (~50%) и опосредованном супероксидом (~50%) образовании перекиси водорода комплексом I дыхательной цепи.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM08-356, 15.02.2009.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.